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微量法 100T/96S
血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷,以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切,在以 mg/dL 表示時(shí),二者的乘積([Ca]×[P])為 30~40。當(dāng)([Ca]×[P])>40,則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織;若([Ca]×[P])<35 則妨礙骨的鈣化,甚至可使骨鹽溶解,影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。上述平衡受到維生素 D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。
測(cè)定原理:
去除血清中有機(jī)磷后,無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,被硫酸ya鐵還原后呈藍(lán)色,在 620nm 有光吸收;通過(guò)測(cè)定 620 nm 吸光度,計(jì)算血液中磷含量。
產(chǎn)品名稱 | BX6012-100T/96S | Storage |
試劑一:液體 | 100ml | 4℃ |
試劑二:液體 | 1.6ml | 4℃ |
試劑三:粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)液:液體 | 1 支 | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前配制,依次加入 11ml 蒸餾水充分溶解,再加入試劑二,充分混合。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1 支,1 mmol/L 無(wú)機(jī)磷,4℃保存。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 620 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液,室溫解凍。
3. 血清預(yù)處理:吸取 50 μl 血清,加 950μl 試劑一,混勻后室溫 8000rpm,離心 10min,取上清液,待測(cè)。
4. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μl 蒸餾水,50μl 試劑一,100μl 試劑三,混勻后靜置10min,于 620 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 空白管。
5. 標(biāo)準(zhǔn)管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液,50μl 試劑一,100μl 試劑三,混勻后靜置10min,于 620 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
6. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μl 上清液,50μl 試劑一,100μl 試劑三,混勻后靜置10min,于 620 nm 測(cè)定吸光度,記為 A 測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
血磷含量(mmol/dL)=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V 樣總=2×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)液:1 mmol/L;樣品稀釋倍數(shù):(50 μl 血清+950μl 試劑一)÷50 μl 血清=20;V 樣總:100 ml=0.1 L。
1、試劑三需臨用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用 3 天;
2、測(cè)定過(guò)程中,應(yīng)盡量避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無(wú)機(jī)磷含量增高。
3、zui低檢出限為 10μmol/L。
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