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磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2 位脂酰基水解酶，廣泛存在于動植物組織、細菌、細胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細胞信號傳遞、脂質過氧化修復、宿主反應等生理過程，在控制體內磷脂類物質平衡、調節機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發揮著及其重要的作用。
磷脂酶A2 作用于 2-硫代十六酰乙基磷酸dan堿（HEPC）產生游離巰基，與DTNB 反應生成黃色物質，在 412nm 處有特征吸收峰。
產品名稱 | BR6029-50T/24S | Storage |
提取液液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 5 瓶 | -20℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑三：液體×5 瓶，-20℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加入 4.5mL 試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
天平、超速冷凍離心機、研缽、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿。
1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
2. 細胞：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
3. 血清：直接測定。
對照管 | 測定管 | |
樣品（μl） | 100 | 100 |
試劑二（μl） | 900 | |
試劑三（μl） | 900 | |
充分混勻，37℃反應 10min，于 1mL 玻璃比色皿，蒸餾水調零， 測定 412nm 處吸光值，記為A 對照管和A 測定管，△A=A 測定管- A 對照管 | ||
計算公式：
1. 按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC 產生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2 活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2. 按照樣本質量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC 產生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2 活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（e×d）×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 細胞數量計算
酶活性定義：每 104 個細胞每分鐘水解HEPC 產生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2 活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×細胞數量÷V 樣總）÷T
= 73.53×△A÷細胞數量
4 按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC 產生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2 活性（nmol/min/mL）= △A÷（e×d）×V 反總÷V 樣÷T
= 73.53×△A
e：TNB 消光系數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣：反應體系中加入樣本體積，0.1mL；W：樣本質量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；
T：反應時間，10min
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