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2× KOD PCR Master Mix (含染料)
2× KOD PCR Master Mix(含染料)
目錄號:71517
產品內容
產品成份 | 71517-05 | 71517-0100 |
2× KOD PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 2 年。經常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 個月。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
本產品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液，濃度為2×。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同時具有合成速度快的特點，聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNAPolymerase的2倍，達到100-138bp/秒，可以在短時間內獲得高產量的擴增產物，特別適合于高保真地擴增6kb以內的PCR 產物，擴增所得的DNA為平末端，可用于基因克隆、表達及突變分析等分子生物學實驗。
KOD擴增的PCR產物為平末端（Blunt），可直接用于Blunt載體克隆（Cat#V116、V117）
本產品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、測序等后續操作。
產品特點
1. 高產：產量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 100-138bp/sec！
3. 高成功率：對于高 GC 模板和特殊結構的復雜模板有良好效果！
2 × KOD PCR Master Mix 使用說明：
一、配制 PCR 反應體系：(于冰上配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終濃度 |
2× KOD PCR Master Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | <0.2 μg | <0.5 μg | as required |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
參考模板用量：（以 50 μl 反應體系為例）
質粒：0.1-10 ng；
細菌基因組：10-100 ng；
人類基因組：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：用 ddH2O 補足反應體系（體積）至 50 μl。實際操作中，首先要計算好需要補加 ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后，離心數秒使反應混合物沉到管底，然后將反應管置于 PCR 儀中進行擴增。
二、設置 PCR 循環條件：（請根據實際情況適當調整）
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 20-30 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 20-30 seconds | |
Extension | 72℃ | 1-4kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果擴增片段小于 4 kb，建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec；
如果擴增片段大于 4 kb，建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。
三、結果檢測：反應結束后取 5 µl 反應產物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。
2× KOD PCR Master Mix(含染料)
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