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幾丁質酶（Chitinase）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細胞壁中。而幾丁質酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點。
幾丁質酶水解幾丁質產生N-乙酰氨基葡萄糖，進一步與對二甲氨基苯甲醛產生紅色化合物，在 585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。
產品名稱 | BI6044-50T/24S | Storage |
提取液：液體 | 100 ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 10 ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 10 ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 10 ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 20 ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 | |
試劑二：液體 10 ml×1 瓶，4℃保存。（若出現結晶，可 80℃左右加熱溶解后使用）
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿，蒸餾水。
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積( ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1 ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。
2. 真菌：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1 ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測。
3. 培養液：直接測定。
對照管 | 測定管 | |
粗酶液（µl） | 400 | 400 |
提取液（µl） | 600 | 200 |
試劑一（µl） | 400 | |
混勻，37℃水浴 1h | ||
試劑二（µl） | 200 | 200 |
混勻，沸水浴 7min，5000rpm，4℃，離心 10min，取上清 1000µl。 | ||
試劑三（µl） | 200 | 200 |
試劑四（µl） | 400 | 400 |
混勻，37℃，15min，蒸餾水調零，1 ml 玻璃比色皿，測定A585，ΔA=A 測定-A 對照。 | ||
計算公式：
標準曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995
計算公式：
1、按照樣本重量計算
酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質產生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
幾丁質酶活性（mg/h/g 鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T
=8.096×（ΔA +0.003）÷W
2、按照蛋白質濃度計算
酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質產生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。幾丁質酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T
= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr
3、按細胞數量計算
酶活定義：37℃條件下，每 104 個細胞每小時分解幾丁質產生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)
=8.096×（ΔA +0.003）÷細胞數量
4、按液體體積計算
酶活定義：37℃條件下，每毫升培養液每小時分解幾丁質產生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性（mg/h / ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=8.096×（ΔA +0.003）
V 反總：反應體系總體積，1 ml；V 樣：反應體系中樣本體積，0.4 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml； W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ ml
1、反應結束后立即進行比色。
2、試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護措施。
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