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考馬斯亮藍G250染料試劑 凝膠染色
Bradford 法是常用的蛋白濃度檢測的方法,與傳統方法相比,更簡單、更穩定、兼容性更 好,Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M,DTT的濃度可高達5mM,但受高濃度的去垢劑的影響明顯,故在用BradfordProtein Assay Kit 進行蛋白定量時,需確保SDS低于0.01%,TritonX-100低于0.05%,Tween20,60, 80 低于0.015%,含高濃度去污劑的蛋白定量,建議采用BCAProteinAssayKit。
考馬斯亮藍G250染料試劑由考馬斯亮藍G250、乙醇、磷酸等組成,用于考馬斯染料結合 (Bradford)分析的總蛋白測量,其特點在于對蛋白樣品中可能存在的大多數鹽、溶劑、緩沖液、 硫醇、金屬螯合劑、還原性物質等均不排斥,檢測濃度下限達到25μg/ml,最小檢測蛋白量達到 0.5μg,待測樣品體積為1~20μl,在50~1000μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。
自備材料
1、酶標儀或分光光度計
2、蒸餾水
3、96 孔板或比色杯
操作步驟(僅供參考)
1、稀釋蛋白標準(一般為BSA5mg/ml)使其終濃度為0.5mg/ml。注意:蛋白樣品在什么溶液中,蛋白標準也應用什么溶液稀釋,也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋蛋白標準。
2、將標準品按0,1,2,4,8,12,16,20μl 加到 96 孔板的蛋白標準孔中,加蛋白標準稀釋液補足至 20μl。
3、加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中,補加標準品稀釋液至20μl。
4、各孔加入200μl考馬斯亮藍G250染料試劑,室溫放置3~5min。
5、酶標儀測定595nm波長處的吸光值,560~610nm之間的波長也可。
6、根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。
考馬斯亮藍G250染料試劑 凝膠染色
產品訂購信息:
P2810 考馬斯亮藍G250染料試劑 100ml / 500ml
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